Matrigel 丨康宁基质胶使用指南

包被涂层方法：

  注意：在康宁支持网页上发布了具体的应用程序*。康宁基底膜基质产品的蛋白质浓度是批次特异的并提供在分析证明书上。通过计算需要的特定蛋白浓度(mg/mL)获得了稀释康宁基底膜基质产品的一致结果。为了维持凝胶化的一致性，我们推荐不要将康宁基底膜基质稀释到少于 3 mg/mL。请使用冰冷的无血清培养基来稀释康宁基底膜基质。通过在冰上移液管上下吸液或涡旋小瓶来混合。

薄层凝胶法
  1. 依照推荐的方法解冻康宁基底膜基质。使用预冷的移液管，将康宁基底膜基质混合至均匀。
  2. 将培养板放置在冰上，以 50 μl/cm2向生长表面加入康宁基底膜基质。
  3. 将培养板放置在 37 °C ，30 分钟。
  4. 如果有必要的话，请在使用无血清培养基轻柔漂洗前吸出未结合的材料。请确保移液器的吸头不要刮擦包被的表面。培养板现在可以使用了。

厚层凝胶法
  1.  依照推荐的方法解冻康宁基底膜基质。使用预冷的移液管，将康宁基底膜基质混合至均匀。
  2. 将培养板放置在冰上。向康宁基底膜基质中加入细胞并使用预冷的移液管悬浮。以150-200 μl/cm2向生长表面加入康宁基底膜基质。
  3. 将培养板放置在 37°C，30 分钟。现在可以添加培养基了。细胞也可以培养在这一凝胶的顶部。

薄层包被法
  1. 依照推荐的方法解冻康宁基底膜基质。使用预冷的移液管，将康宁基底膜基质混合至均匀。
  2. 使用无血清培养基将康宁基底膜基质稀释到需要的浓度。对于您的应用程序，您应该完成以经验为主的研究来确定您的最适包被浓度。
  3. 向被包被的容器中加入稀释的康宁基底膜基质。加入的量应该足以容易地覆盖整个生长表面。在室温下培养 1 个小时。
  4. 吸出未结合的材料并使用无血清培养基轻柔地漂洗。培养板现在可以使用了。

细胞复苏：
  康宁中性蛋白酶(货号 354235)，康宁细胞复苏溶液(货号 354253)。使用康宁细胞复苏溶液在冰上 7 小时内解聚康宁基底膜基质能够实现将生长在康宁基底膜基质上的细胞最有效地复苏，或者使用中性蛋白酶，考虑到连续培养，中性蛋白酶作为一种金属酶可以分散细胞。

注意事项
  因为康宁基底膜基质在 10°C 以上会开始凝胶化，所以极其重要的是康宁基底膜基质和所有的进入与康宁基底膜基质接触的培养皿或培养基都应该预冷。产品需要放置于冰上，并在 2oC-6oC 的冰箱中或者冷室中过夜融化，蛋白浓度高时可能需要更多时间。操作康宁 Matrigel matrix时，我们建议使用预冷的移液管、吸头和管子。在实验的全部过程中请保持康宁基底膜基质处于冰上。

常见问题
1.康宁高浓度 Matrigel matrix 用于哪些实验？
康宁高浓度的 Matrigel matrix matrix 可适用于体内应用研究，如高浓度蛋白可促进肿瘤生长。高蛋白浓度同时可使康宁 Matrigel matrix 注射入小鼠皮下后保持完整，有利于注射的肿瘤细胞和/或血管生成因子保持原位，便于用于原位分析和/或以后的切除。

2.如何将康宁 Matrigel matrix 用于 3D 培养？怎样制作 3D 胶？需要将细胞嵌入到康宁 Matrigel matrix 中吗？
康宁高浓度的 Matrigel matrix 可适用于体内应用研究，如制备厚层包被用于 3D 细胞培养。细胞可以嵌在康宁 Matrigel matrix 中或者接种在康宁 Matrigel matrix 表面（覆盖法）。

3.使用 Corning Matrigel matrix 时，需要将移液器吸头和离心管预冷吗？
是的。因为 Corning Matrigel matrix 在高于 10℃的条件下即会开始成胶，我们推荐操作 Matrigel matrix 时使用预冷的移液管、吸头和离心管。

4.Corning Matrigel matrix 会快速聚合吗？
Corning Matrigel matrix 在 22℃至 35℃时会快速聚合成胶。

5..什么情况下，需要使用无酚红 Corning Matrigel matrix？
对于涉及颜色检测的实验，推荐使用无酚红 Corning Matrigel matrix，如使用荧光染料或 Drabkins 法计数内皮细胞成管实验。对于子宫内膜细胞培养，也需使用无酚红 Corning Matrigel matrix。
此外，酚红和非甾体雌激素结构类似，有类雌激素效应。在实验动物体内可能具有干扰内分泌和荷尔蒙代谢的能力。

6.如何从 Corning Matrigel matrix 中收获细胞？
推荐使用 Corning Dispase 或 Corning Cell Recovery Solution 来收获培养在Matrigel matrix 中的细胞。

Corning Dispase 相比胰酶、胶原酶或其他蛋白水解酶能够更温和有效地获得单细胞悬液，不会损伤细胞或细胞表面蛋白。对于需要继续接种培养或进行检测的细胞，使用 Corning Dispase 不会产生损伤。此外，Corning Dispase 也可以用于组织分离。

对于代谢研究和 RNA 抽提，建议在 4℃使用 Corning Cell Recovery Solution 进行非酶反应的细胞收获。因为 Corning Matrigel matrix 中含有痕量的 RNA，进行RNA 分析时，应设一个 Corning Matrigel matrix（不接种细胞）的对照组。

7.其它从 Corning Matrigel matrix 中收获细胞的方法：
降低温度至 4℃ - 6℃使 Matrigel matrix 解聚，需要一定的时间并且仅适合一部分应用。
离心以破坏 Corning Matrigel matrix 结构。