产品名称：Inspire Spark©PrimeRNP Kit
产品货号：MJ5460 （ 50 rxn）、MJ5461 （20 rxn）、MJ5462（6 rxn）
产品简介
InspireSpark©PrimeRNP Kit试剂盒（货号：MJ5460）是一款基于自递送 CRISPR/SpCas9系统的基因编辑工具，专为基因敲除（KO）和基因敲入（KI）实验优化设计。通过创新的递送机制，无需依赖电转仪等复杂设备即可在原代细胞及各类细胞系中实现高效编辑，经严格验证，基因敲除、基因敲入效率达 85-90%，同时保持极低脱靶率及无细胞毒性特性，为研究者提供安全可靠的实验解决方案。
储存条件与有效期
短期储存：解冻后保存于-20℃冰箱，避免反复冻融。
长期储存：未开封试剂盒保存于-80℃冰箱。开封后如长期不使用保存于-80℃冰箱 。
有效期：18个月
实验步骤
以人原代T细胞（1x106个细胞）为例.
一. 转导复合物制备
1.取1.5μL SgRNA（100μM）与1.5μL Solution I 于1.5mL（DNase-Free、RNase-Free）离心管中混合，37℃孵育5-10分钟，形成RNP复合物。
注： 先加SgRNA再加Solution I
2. 加入50μL预平衡至室温的Solution II（使用前涡旋混匀），充分混匀后室温静置5分钟
二. 细胞转导
1. 预处理细胞：激活1x106个T细胞48小时后，以300xg离心洗涤并转移至新培养板，次日进行编辑操作。
2. 离心收集细胞，彻底移除培养基（建议使用OptiMEM或PBS清洗残留）。
3. 将细胞沉淀重悬于制备好的转导复合物溶液中，轻柔混匀后，37℃孵育45分钟。
三. 细胞培养与效率检测
1. 向转导后的细胞混合液中加入600μL含10% FBS及200U IL-2的T细胞培养基，重悬后接
种至24孔板，维持细胞密度为2-3×10?/mL。
2. 37℃培养4-5天后，检测基因编辑效率。
注意事项与扩展应用
1. AAV辅助敲入（KI）：若需联合 AAV（MOI: 2×10?-5×10?）进行KI，按以下操作：
AAV体积 ≤ 5μL时：于步骤一（RNP制备阶段）加入。
AAV体积＞5μL时：于步骤三（细胞培养阶段）加入。
2. 慢病毒辅助实验：激活24小时后感染，72小时进行编辑转导。
3. 多基因编辑：
- 方案A：步骤一中混合多靶点RNP复合物。
- 方案B：在不同时间点分步转导不同RNP复合物。
4. 细胞状态要求：转导前需确保细胞活性＞90%，编辑效率与细胞状态直接相关。
5. 电转兼容性：Solution I 中的eSpCas9蛋白可单独用于电转，效率较野生型提升30%。
贴壁细胞需消化离心后按上述步骤操作。
6. 本实验需使用DNase-Free、RNase-Free耗材。
常见问题：
InspireSpark® PrimeRNP Kit Q&A
Q：T细胞激活48小时后离心清洗的清洗液及铺板培养基要求？
A：清洗液为实验原用的T细胞培养基。操作流程：轻柔吹吸重悬细胞 → 离心（400 ×g, 5
min）→ 彻底弃上清 → 用新鲜配制的同款T细胞培养基重悬细胞。目的：防止T细胞过度激
活、去除碎片、优化细胞状态。
Q：实验步骤中FBS能否替换为其他添加剂？
A：可使用人AB血清或无血清培养基（注：无血清条件下细胞生长状态可能减弱）。
Q：转导培养基含IL-2或血清替代物是否影响转导？
A：无影响。通过离心清洗彻底弃除上清（避免血清蛋白干扰），最终使用转导复合物重悬
细胞沉淀即可。
Q：同时编辑两个基因是否需要配置两份混合液？能否同时加入细胞？
A：仅需将RNP1与RNP2加入同一份Solution II中孵育，无需分装多份Solution II。混合后的
复合物可同时加入细胞。
Q：敲除（KO）和敲入（KI）能否同时实现？最多支持几个基因编辑？
A：支持同步操作。多基因编辑需在制备转导复合物时进行多RNP制备，或分次转导（建议
：首次转导≤2个基因，间隔48小时后再转导≤2个基因）。
Q：Solution II能否搭配其他厂家的Cas9蛋白？是否支持电转
A：可以使用，但未经大量数据验证，无法保证其编辑效率。
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红荣微再 MJ5461：精准基因编辑方案，突破电转瓶颈 · 原代细胞高效编辑 · 85-90% KO/KI效率
