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Takara 6144 vs 普通IVT试剂盒:mRNA体外转录合成试剂盒
  • 品牌:Takara
  • 产地:日本
  • 货号:6144
  • 发布日期: 2026-07-17
  • 更新日期: 2026-07-17
产品详请
产地 日本
品牌 Takara
货号 6144
用途 mRNA体外转录合成试剂盒
包装规格
CAS编号
纯度 %
是否进口

一、mRNA体外转录试剂盒选择的关键考量

IVT是mRNA疫苗、基因 和细胞 的核心技术,试剂盒的选择直接影响:
  • mRNA产量和合成成本
  • 加帽效率和翻译活性
  • 修饰核苷酸的灵活性和免疫原性控制
  • 操作复杂度和批次一致性
  • 下游应用的兼容性(转染/LNP/注射)
本文以Takara 6144 IVTpro™ T7 mRNA Synthesis Kit为例,从技术维度解析高性能IVT试剂盒的选购要点。

二、IVT试剂盒的核心评估标准

表格
评估维度 标准要求 Takara 6144表现
产量 ≥100 μg/20 μL ✅ 高达200 μg以上/20 μL
反应放大 支持10倍放大 ✅ 可放大至200 μL,产量线性提升
T7酶效率 高特异性、低 abortive transcription ✅ 优化T7 RNA Polymerase
NTP包装 独立包装优先 ✅ 四种NTP独立10×包装
修饰兼容 支持修饰NTP替换 ✅ 支持N1-Me-PseudoU等替换
加帽兼容 支持CleanCap/ARCA ✅ 兼容CleanCap AG
模板去除 包含DNase I ✅ 内置DNase I
纯化方案 包含简便纯化试剂 ✅ 包含LiCl沉淀溶液
阳性对照 包含对照模板 ✅ 包含FLuc阳性对照模板
批次一致性 CV<10% ✅ Takara严格质控

三、Takara 6144技术参数深度解析

1. 优化T7 RNA聚合酶与反应体系Takara通过优化T7 RNA Polymerase的缓冲体系和NTP浓度配比,实现超高产量:
  • 酶浓度优化:10× Enzyme Mix含高活性T7聚合酶,确保转录起始效率和延伸速度
  • 镁离子平衡:优化Mg²⁺浓度,平衡聚合酶活性与忠实性
  • 模板亲和力:优化的酶对T7启动子结合更强,减少abortive transcription产物
  • 产量数据:1 μg FLuc模板,20 μL反应,2 h,产量180-220 μg(竞品通常100-150 μg)
2. 独立NTP包装的技术优势6144将四种NTP独立包装,而非预混:
包装方式 优点 缺点 适用场景
预混NTPs 操作简便,减少加样步骤 无法替换单个NTP 常规无修饰mRNA
独立NTPs(6144) 可替换UTP为修饰核苷酸 多一步加样 修饰mRNA、疫苗开发
修饰核苷酸替换策略:
  • N1-甲基假尿苷(N1-Me-PseudoUTP):替代UTP,降低TLR7/8识别,减少先天免疫激活
  • 假尿苷(PseudoUTP):增强翻译效率,提高mRNA稳定性
  • 5-甲基胞苷(5-Me-CTP):与PseudoU联合使用,进一步优化免疫原性
  • 比例灵活:可调整单个NTP浓度,优化特殊序列(如高GC含量模板)的转录效率
3. CleanCap共转录加帽机制6144兼容TriLink CleanCap® Reagent AG共转录加帽:
反应体系组成(20 μL):

组分 体积/用量 功能
10× Transcription Buffer 2 μL 提供Mg²⁺和缓冲体系
线性化模板DNA 1 μg T7启动子驱动转录
CleanCap Reagent AG 4 mM(终浓度) 共转录加帽,形成Cap 1
ATP/CTP/GTP 各1× 标准NTP
UTP或修饰UTP RNA合成
10× Enzyme Mix 2 μL T7聚合酶
Nuclease-Free Water 补足至20 μL -
反应条件:37°C,2-4 h,合成Cap 1修饰mRNA,产量>95%加帽效率。
4. 简便纯化与质量控制
  • DNase I消化:IVT后加入DNase I,37°C 15 min, 去除模板DNA
  • LiCl沉淀:加入LiCl溶液,-20°C沉淀30 min,离心收集mRNA
  • 纯度评估:NanoDrop A260/A280 1.9-2.1,A260/A230 2.0-2.3
  • 完整性验证:琼脂糖凝胶电泳或毛细管电泳,主峰清晰,无降解 smear


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