品名：cygnus 毕赤酵母宿主细胞蛋白检测试剂盒
产品型号：F140
产品规格：96T/盒
产品商标：cygnus
产品简介：
Pichia pastoris毕赤酵母基因表达系统经过十多年发展，成为较完善的外源基因酵母表达系统，具有易于高密度酵母发酵，欲表达基因可以稳定整合在宿主酵母基 因组中，能使产物有效分泌并适当糖基化，培养方便经济等特点。Pichia pastoris毕赤酵母基因表达系统利用 可调控启动子AOX1，已高效表达了HBsAg、TNF、EGF、破风毒素C片段、基因工程抗体等多种外 源基因，证实Pichia pastoris毕赤酵母表达系统为高效、实用、简便 ，以提高表达量并保持产物生物学活性为突出特征的外源基因表达系统，而且非常适宜扩大为工业规模Pichia pastoris毕赤酵母发酵
Pichia pastoris HCP ELISA试剂盒用于检测在毕赤酵母表达系统中重组表达的产物宿主细胞蛋白污染。 检测浓度<0.3ng/mL。
检测原理：
Pichia pastoris HCPs检测是一个双位点酶联免疫检测。样本中包含的Pichia pastoris HCPs蛋白与标记有抗- Pichia pastoris抗体的辣根过氧化物酶同时反应，反应发生在之前涂有一层吸附性抗- Pichia pastoris蛋白抗体的微量滴定板中进行。免疫反构成为夹层式结构：固相抗休-HCP-酶标记抗体。反应结束后清洗微量滴定板去除未结合反应物。添加 TMB作用底物反应。微量滴定板读数器上测定水解物浓度，水解物浓度与Pichia pastoris HCPs蛋白浓度成比例。用提供的标准液绘制标准曲线，根据读数可以计算出Pichia pastoris HCPs蛋白含量。

结果分析：

标准液(0, 1, 4, 20, 75, 250ng/mL)可用于制作标准曲线，标准液浓度相当于免疫反应HCP总浓度。根据测定的小孔中标准液吸光值绘制标准曲线。数据分析可以使用计算机选配曲线，例如点到点，三次样本函数，或四参数逻辑曲线。不要使用线性回归分析修改样品吸光值，这样会出现显著误差。也可以手工绘图，Y轴标注吸光值，X轴标注浓度。然后根据样品吸光值计算出样品中HCP浓度。（操作时每一浓度标准液都要重复滴定到两个小孔中，以便计算平均分光光度值，样品也需计算平均吸光值）。

产品组份：
● Anti- Pichia pastoris:HRP(辣根过氧化物酶标记)          1x12mL   F141(Product#)
● Anti- Pichia pastoris coated微量滴定板                       12x8孔   F142
● Pichia pastoris HCP标准液(0, 1, 4, 20, 75, 250ng/mL)   1mL/瓶  F143
● Stop Solution终止液(0.5M硫磺酸)                          1x12mL  F006
● TMB (3,3’,5,5’-四甲基联苯氨)                                      1x12mL  F005
● Wash Concentrate清洗物(20倍浓缩)                            1x50mL   F004
保存温度：
2～8℃
产品订购信息：
F410 Cygnus E.coli HCP ELISA Kit       96T/盒
F500 Cygnus Vero Cell HCP ELISA Kit 96T/盒

F140 Cygnus Pichia pastoris ELISA Kit 96T/盒

FAQ：

HCP ELISA 是“定量”还是“半定量”？

Cygnus 官方对此的定位很明确：HCP 检测本质上是半定量的。原因在于，目前没有公认的 HCP 参考品可用于 校准；ELISA 虽然对单一分析物是定量的，但 HCP 检测试图在一个孔中用同一套报告系统同时测量数百种潜在 HCP，只能做到相对估计。此外，抗体制备和标准品选择本身就包含诸多人为假设——比如用哪种细胞状态制备免疫原、标准品中的 HCP 组成是否与终产品一致，以及不同 HCP 对抗体的亲和力差异如何影响定量准确性。因此，结果应理解为“总免疫反应性 HCP 等效值”（total immunoreactive HCP equivalents），而非 蛋白质量。

这个试剂盒能覆盖所有毕赤酵母 HCP 吗？

不能保证“所有”，但覆盖范围较广。以 F1015（3G）为例，抗体经 AAE™ 和质谱表征，对 HCP 的反应性约为 88– ，且专门针对低分子量、低免疫原性杂质做了优化。F140 同样设计为“generic”试剂盒，旨在与尽可能多的 HCP 反应，不依赖于特定纯化工艺。但任何 HCP 试剂盒都无法保证对你样品中每一种 HCP 都有足够抗体过量，这也是后续稀释线性验证必要的原因。