产品名称：康为世纪 无内毒素质粒中提试剂盒

产品货号：CW2105S

额外试剂要求：

无水乙醇，异丙醇。

产品组分：

实验前准备：

1．所有组分可在干燥、室温（15-30℃）环境稳定保存1年，更长时间保存可置于2-8℃，加入RNase A的Buffer P1 置于2-8℃可稳定保存6个月。

2． 次使用前，将RNase A溶液全部加入到Buffer P1中，混匀，置于2–8℃保存，使用前需在室温中放置一段时间，恢复至室温后使用。

3． 次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。

4．使用前请先检查Buffer P2 和Buffer E3是否出现结晶或沉淀，如有结晶或沉淀现象，可在37℃水浴几分钟，即可恢复澄清。

5．注意不要直接接触Buffer P2和Buffer E3，使用后应立即盖紧盖子。

6．提取质粒的量和纯度与细菌培养浓度、菌株种类、质粒大小、质粒拷贝数等因素有关。

使用说明：

1．取5-15 ml过夜培养的菌液，加入离心管（自备）中，13,000 rpm（~16,200×g）离心1分钟收集细菌，尽量吸弃全部上清。

2．向留有菌体沉淀的离心管中加入500 μl Buffer P1（请先检查是否已加入RNase A），使用移液器或涡旋振荡器充分混匀，悬浮细菌沉淀。

3．向离心管中加入500 μl Buffer P2，温和地上下颠倒混匀8-10次，使菌体充分裂解，室温放置3-5分钟。此时溶液应变得清亮粘稠。

4．向离心管中加入500 μl Buffer E3，立即上下颠倒混匀8-10次，此时出现白色絮状沉淀，室温放置5分钟。13,000 rpm离心5分钟，吸取上清，将上清加入过滤柱（Endo-RemoverFM）中（已装入收集管），13,000 rpm离心1分钟过滤，将收集管中的滤液转移到离心管（自备）中。

5．向滤液中加入450 μl异丙醇，上下颠倒混匀。

6．柱平衡：向已装入收集管的吸附柱（Spin Columns DL）中加入200 μl Buffer PS，13,000 rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

7．将步骤5中滤液与异丙醇的混合溶液转移到平衡好的吸附柱（已装入收集管）中。

8．13,000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

9．向吸附柱中加入750 μl Buffer PW（请先检查是否已加入无水乙醇），13,000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。

10.将吸附柱重新放回收集管中，13,000 rpm离心1分钟。

11.将吸附柱置于一个新的离心管（自备）中，向吸附膜的中间部位加入100-200 μl Endo-Free Buffer EB，室温放置2-5分钟，13,000rpm离心2分钟。-20℃保存质粒。

保存条件：室温（15-30℃）

产品订购信息：

品牌             货号             名称                                     规格

康为世纪  CW2105S  EndoFree Plasmid Midi Kit     50 preps